**NCI-H1975人肺腺癌细胞培养指南**

一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：首次建议1:2传代，通常每2天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集非使用的培养基，作为过渡培养使用。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后，最好将其灌满完全培养液并封好瓶口以确保运输安全。收到细胞后，首先用75%酒精消毒整个培养瓶，随后在超净工作台上进行无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态。进行显微镜观察，并对细胞进行不同倍数拍照保存（推荐40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如无照片，将默认细胞收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管并保留5ml培养基继续培养。当细胞密度超过80%时，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，则可终止消化。
3. 用5ml以上完全培养基轻轻吹打，使细胞完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清。
4. 重悬细胞并按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS冲洗。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化。
3. 将细胞悬液转移至离心管中，1000 RPM离心5分钟，再弃上清。
4. 加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中并存放于-80℃冰箱，随后如果要转移至液氮罐，需在-80℃保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，待无结晶后消毒管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中由于粘附不牢而出现脱落现象，这属正常现象。请将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，随后加入胰酶，消化1-2分钟后再终止反应。调整后可按照1:2比例进行传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题时可重发的情况：

1. 运输过程中遭遇问题（如细胞丢失或瓶身破损等），将重发。
2. 细胞污染问题，需在收到后48小时内提供真实实验结果，确认后重发。
3. 常温或干冰运输后细胞复苏24小时未存活者，需提供状态照片，重发。
4. 如在细胞复苏期间发生污染，将根据情况重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提供实验结果，良好验证后重发。
6. 收货当天及接下来的2-3天内拍照。如3天内未告知，视为合格。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：

1. 客户自行造成的细胞污染，不重发。
2. 不当操作导致细胞状态不良者，不重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞不良状态的，不重发。
4. 未提供细胞培养前3天照片的，不重发。
5. 培养中经过其它处理的，不重发。
6. 收到后2天内未反馈的，不重发。

通过以上细致的细胞培养流程和售后服务条款，我们希望能为您的实验提供强有力的支持。**人生就是博-尊龙凯时**将继续致力于为科学研究提供优质的细胞资源.