人生就是博-尊龙凯时推出了一款基于探针法的荧光定量PCR检测试剂盒，旨在帮助科研人员更有效地进行样本分析。该产品具有以下显著特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，便可直接使用。
2. 优化引物组合：本试剂盒的引物等组成经过精心设计，具备高灵敏度。
3. 阳性对照的提供：内含阳性对照，帮助用户有效区分假阴性样品。
4. 高特异性：引物基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计，确保无交叉反应。
5. 多样的检测功能：可同时用于定性和定量检测，定量检测时线性范围至少达到5个数量级。
6. 充分的实验支持：产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 该产品仅限于科研使用。

操作方法

1. DNA提取

用户可采用自选的方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2. 稀释标准曲线样品

针对阳性对照浓度较高的特点，稀释操作必须在独立区域内进行，以避免污染。具体步骤如下：

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 使用带芯枪头添加45μL DEPC-H2O到每个管中。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，混匀后生成1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，冰上待用。
4. 依次用新枪头添加阳性对照，逐步稀释至1×10E6和1×10E5拷贝/μL，直至完成所有6个稀释的标准曲线样品。

3. 试剂配制

准备待检样品所需的PCR管，数量为N+2（N个样品+1阴性对照+6个阳性对照），并向每个PCR管中添加指定成分（具体详见说明书）。

4. 添加模板

向qPCR管中添加2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

5. 扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中，按照说明书中的扩增程序进行操作。

6. 结果分析

若制作标准曲线，则阳性对照浓度的log值作为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线并推算样品DNA浓度。
如果未制作标准曲线，结果判定依如下标准：
- 阳性对照：Ct值<30，表现出明显的指数增长及典型S型曲线。
- 阴性对照：Ct值为38或无Ct值，无明显增长。
- 样品检测：Ct值<35，表明样本中检测到婴儿利什曼虫；Ct值38或无Ct值则表明未检测到。如果Ct值在35-38之间，应进行复检。

运输及保存

本产品应低温运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，以避免污染其他试剂。
选择人生就是博-尊龙凯时的试剂盒，助力您的科研探索之旅。