培养条件:

气相组成为95%空气与5%二氧化碳；温度控制在37℃。采用DMEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）进行细胞贴壁培养。

A-673细胞株来源于一名15岁女性患者的横纹肌肉瘤。在软琼脂培养基中可形成克隆，并在免疫缺陷小鼠体内具有肿瘤形成的能力。此细胞株存在四个以上的标志性染色体，一个额外的F染色体以及两个异常的B染色体。

传代方法:

首次传代时建议采用1:2的比例。在培养的前两天内定期更换培养基。为了优化细胞处理效果，建议在购买细胞时同时选购补充培养基，以获得更多优惠。在收到细胞后，务必养护至良好状态，然后将其灌满完全培养液并封好瓶口，这是细胞运输的最佳方式。

细胞处理步骤包括：

1. 使用75%酒精对细胞瓶进行全面消毒，之后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞稳定。
2. 在显微镜下观察细胞的生长情况，并以不同倍率拍照记录（建议使用40x、100x及200x三种倍数各一张），前三天的照片为重要的跟踪依据。如果未能提供照片，默认细胞状态良好。

细胞培养步骤:

对于贴壁细胞的传代，如细胞密度未超过80%，需将培养液收集至离心管，留少量液体续种至37℃、5%CO2环境中；如细胞密度超标，则应及时进行传代。

具体步骤如下：

1. 弃去培养液，使用不含钙镁的PBS对细胞进行洗涤。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶，置于37℃培养箱消化1-2分钟；显微镜下观察细胞变化，如发现细胞圆化并有脱落，迅速终止消化，加入5ml完全培养基。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，去除上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 按照1:2的比例将细胞悬液分瓶，补充5-8ml新的培养基，然后置于37℃、5%CO2培养箱中。

对于悬浮细胞的传代，可以选择半换液法或离心换液法。半换液法需将培养瓶竖着静置一小时，吸走部分培养基后换入新培养基。而离心换液法则需将细胞收集在离心管中后离心，再按比例重悬并分瓶培养。

细胞冻存和复苏:

冻存步骤包括弃去培养液，清洗细胞后加入胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩后及时终止反应并转移至离心管中离心。随后加入无血清冻存液，充分混匀后放入-80℃冰箱保存。若需转入液氮罐，需在-80℃保存至少24小时。

复苏时，从液氮中取出冻存管快速解冻，使用完全培养基重悬细胞，最后接种于T25培养瓶中继续培养。

注意事项: 在运输过程中，有些细胞可能会脱落，属于正常现象。如细胞脱落较多，可将所有培养液收集后离心处理，确保细胞状态良佳。

在细胞培养和处理的过程中，请务必关注细胞的状态和健康，[人生就是博-尊龙凯时]始终为您提供优质的产品与服务，助力您的科研项目顺利进行。